發布時間：2025-09-10 瀏覽量：0
前言
INTRODUCTION
CAR-T治療又稱嵌合抗原受體T細胞治療，指通過基因工程技術導入含有特異性抗原識別片段、T細胞受體活化分子、共刺激信號分子的CAR基因修飾T細胞。CAR-T技術逐漸發展，臨床結果表明CAR-T細胞在應對血液系統惡性腫瘤具有較大的優勢[1]。近年來，多款CAR-T細胞技術產品相繼獲批上市，已經在一些血液腫瘤治療中獲得了巨大成功。
目前CAR-T細胞多基于自體T細胞進行制備，T細胞的數量及質量是影響CAR-T制備及后續效果的一個關鍵因素。大多數血液腫瘤的治療藥物會造成骨髓抑制、T細胞耗竭和T細胞功能缺陷，因此CAR-T細胞采集前有非常嚴格的篩選及洗脫建議，盡管如此，仍有不少患者面臨采集困難、CAR-T制備失敗或因T細胞導致的CAR-T療效不佳等風險，主要原因有：
（1）采集前因腫瘤進展或前序治療所致的ALC數值低需增加單采循環數、腫塊壓迫血管/神經無法建立深靜脈通道等均會增加單采難度，并有失敗的風險；
（2）前序治療藥物可能影響T細胞質量，如接受多輪化療的DLBCL患者的CD27- CD28- 衰老T細胞增加，因此在培養過程中用CD3和CD28激活時，T細胞擴增和活力降低，為獲得足量的CAR-T細胞延遲培養天數同樣會增加CAR-T細胞的衰老和凋亡[2]。
（3）自體造血干細胞移植（ASCT）會顯著改變T細胞亞群的組成[3]，并引發代謝重編程，這些變化可能削弱T細胞在免疫治療中的功能適應性[4]。這一現象在嵌合抗原受體T細胞（CAR-T）治療中尤為重要。
因此在前序治療或早期患者中及早凍存PBMC是良好的方案，能讓自己將來多一份應對疾病的機會。
那么凍存與非凍存的PBMC制備出來的CAR-T的效果是否一致，是應當首要考慮的問題。
2022年Julieta Abraham-Miranda等人發表的研究由Moffitt癌癥中心與Kite Pharma合作完成，系統比較了新鮮與冷凍PBMC作為起始材料在生產第二代抗CD19 CAR-T細胞（分別攜帶CD28或4-1BB共刺激結構域）過程中的差異。研究發現冷凍保存的PBMC制造過程中CAR-T細胞擴增較慢，但不會影響表型。且通過新鮮或冷凍保存PBMC制造CAR-T細胞時，CAR-T細胞激活，細胞因子產生和體外抗腫瘤細胞毒性并沒有差異。這項研究提示我們PBMC的提早冷凍保存可能是解決CAR-T制備過程中T細胞來源問題的解決方案，而不會損害最終CAR-T產品的質量[5]。
研究從30名健康供者中同時獲取新鮮和冷凍的PBMC，使用相同的病毒批次并行制備CAR-T細胞（h1928z與h19BBz），研究首先通過流式細胞術評估了冷凍保存對導入效率和CAR密度的影響。結果顯示新鮮或冷凍保存的PBMCs之間沒有觀察到導入效率和CAR密度的顯著差異。
但冷凍保存的PBMC顯著增加了擴增期間CAR-T細胞的倍增時間。與h1928 zfresh CAR-T細胞相比，h1928 zcryo中的倍增時間高1.25倍，而h19 BBzcryo中的倍增時間比h19 BBzfresh CAR-T細胞高1.5倍。
以往研究證明，CAR-T細胞的擴增、持久性和抗腫瘤活性取決于細胞表型，分化程度較低的表型CAR-T細胞療法中的功能越強，該研究中CD4/CD8比例，T細胞記憶亞群（如中央記憶型、效應記憶型）分布，新鮮組與冷凍組之間無顯著差異。這說明冷凍并未改變T細胞的基本特征。
線粒體穩態在CAR-T細胞存活和功能中起關鍵作用。線粒體生物發生和線粒體自噬的誘導對于維持線粒體健康以滿足活化的CAR-T細胞的ATP需求至關重要。研究分析了線粒體膜電位、生物量以及激活誘導的細胞凋亡水平，兩組之間保持一致，表明冷凍并未損害T細胞的代謝健康或抗凋亡能力。
冷凍未影響CAR-T與靶細胞接觸后的活化、磷酸化水平。
為了進一步比較新鮮和冷凍CAR-T細胞的效應功能，研究量化了用表達hCD 19的靶細胞體外刺激后細胞因子分泌。發現h1928z CAR-T細胞（CD28共刺激）在冷凍組中IFN-γ和TNF-α分泌顯著降低，而h19BBz組則無此現象。但體外細胞溶解實驗表明，新鮮和冷凍h1928 z和h19 BBz CAR-T細胞以相似的動力學和效率溶解靶細胞，說明兩組CAR-T細胞的體外殺傷能力并無差異。
總結來說，冷凍PBMC可作為CAR-T制備的起始材料，雖略微延長擴增時間，但不影響最終產品的表型、激活狀態、代謝健康及體外殺傷效能[5]。
山東省齊魯細胞治療工程技術有限公司是一家以細胞技術研發、臨床研究及細胞類藥物申報為發展方向的高新技術企業。公司以干細胞和免疫細胞技術為核心支撐，主要開展細胞技術的臨床科研與轉化服務、CAR-T等免疫細胞產品、拓展成人細胞存儲業務、開發新型系列細胞衍生品。
公司現階段推出了T細胞凍存項目，以保存優質的種子細胞的理念，預留健康細胞，收獲美好未來的愿景，致力于讓更多有需求的人擁有接受CAR-T治療的機會。
【注】文章內容旨在科普細胞知識，進行學術交流分享，了解行業前沿發展動態，不構成任何應用建議。